利用Cas9核糖核蛋白生成 敲入原级 人类T细胞

T细胞基因组工程在针对癌症、艾滋病、原发性免疫缺陷和自身免疫疾病的细胞疗法方面具有巨大潜力，但人类 T细胞的基因操作一直充满挑战。需要改进的工具，以高效“敲除”基因和“敲入”靶向基因组修饰，以调节T细胞功能并纠正疾病相关突变。CRISPR/Cas9技术正在促进多种细胞类型的基因组工程，但在人类T细胞中其效率有限，且尚未被证明可用于靶向核苷酸替代。本文报告了利用Cas9：单导RNA核糖核蛋白（Cas9 RNPs）在人类CD4（+）T细胞中实现高效的基因组工程。Cas9RNP可消融CXCR4，这是一种用于HIV进入的辅助受体。Cas9RNP电穿孔导致约40%的细胞失去高水平的CXCR4表达，编辑细胞可基于低表达进行分选。值得注意的是，Cas9 RNPs与同源导向修复模板寡核酸结合，在原发T细胞中产生了高频率的靶向基因组修饰。靶向核苷酸替代已在CXCR4和PD-1（PDCD1）中实现，PDCD1是一种调节T细胞耗竭的因子，是肿瘤免疫治疗的有效靶点。对目标位点的深度测序证实，Cas9 RNPs能够以高达20%的效率产生敲入基因组修饰，约占总编辑事件的三分之一。这些结果为Cas9 RNP技术奠定了在原级人类T细胞中多种实验和治疗基因组工程应用的基础。

原标题：Generation of knock-in primary human T cells using Cas9 ribonucleoproteins

通讯作者：Doudna, Jennifer A.

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